HiChrom色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70kg/cm2時(shí),也可采用厚壁玻璃或石英管,管內壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應,不銹鋼柱內壁多經(jīng)過(guò)拋光。也有人在不銹鋼柱內壁涂敷氟塑料以提高內壁的光潔度,其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板,是燒結不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2~20µm(5~10µm),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
HiChrom色譜柱的流動(dòng)相:
1、在進(jìn)行樣品檢測前,至少使用20倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡。流動(dòng)相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配制以保持新鮮避免細菌產(chǎn)生。
2、流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過(guò)濾,消除流動(dòng)相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應重新過(guò)濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱,以免柱性能損壞(添加5%的有機溶劑沖洗色譜柱,同時(shí)可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡)。
3、流動(dòng)相需脫氣后使用,可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區別,應該使用過(guò)度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大或流動(dòng)相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長(cháng)的平衡時(shí)間。